淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥地上部分。淫羊藿具有延緩衰老、降血壓,降血糖,降血脂的功效,可以改善腦缺血缺氧、降低血液黏度、抑制體外血栓形成、刺激骨髓DNA的合成、增加外周血白細(xì)胞及骨髓造血干細(xì)胞的數(shù)量、提高免疫力、促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)、預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗炎,抗病毒,抗腫瘤、對(duì)抗抗癌藥物的副作用。
2005版《中國(guó)藥典》一部收載的含量測(cè)定方法,一要是采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮的含量,二是采用高效液相色譜法測(cè)定其淫羊藿苷的含量。有關(guān)淫羊藿及其制劑中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法主要有高效液相色譜法、薄層掃描法等。下面是高效液相色譜法的說(shuō)明。
2005版《中國(guó)藥典》淫羊藿含量測(cè)定項(xiàng)下:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水(30:70)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為207nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于1500。
供試品溶液的制備:取本品葉片粉末約0.2g,用十分之一天平精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇20m,稱(chēng)定重量,超聲處理1小時(shí),放冷,再稱(chēng)定重量,用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
HPLC法主要的流動(dòng)相系統(tǒng)有:乙腈-水系統(tǒng)、乙腈-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液。
樣品溶液一般以甲醇、稀乙醇為提取溶劑,凈化處理一般用聚酰胺柱或C18小柱處理;也有用正丁醇-碳酸氫鈉、乙醚-醋酸乙酯等試劑萃取。
另外,復(fù)方骨寶片中有效成分淫羊藿苷含量測(cè)定也使用高效液相色譜測(cè)定法。采用高效液相色譜儀色譜柱Shimpack ODS (4.6mm×250mm, 5Lm);流動(dòng)相為乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液(32:68);檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;柱溫30℃。
測(cè)定淫羊藿藥材中淫羊藿苷的含量也可以采用薄層色譜-熒光分光光度法。采用熒光分光光度計(jì);硅膠G硅膠G加0.1mol/L Na2HPO4的羧甲基纖維素鈉溶液自制板;以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)在10℃以下放置后的上層溶液作為展開(kāi)劑;顯色劑:10% AlCl3甲醇溶液;在Ex=430nm,Em =480nm條件下測(cè)定熒光強(qiáng)度。藥材用70%乙醇水浴回流提取。
測(cè)定骨松寶顆粒中淫藿苷類(lèi)化合物的含量采用一階導(dǎo)數(shù)光譜法。用UV紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。樣品供試液制備方法:骨松寶顆!グb→加入70%乙醇,60℃水浴中加熱提取→用60℃水超聲振蕩提取→靜置過(guò)夜→用70%乙醇補(bǔ)足重量→上取聚酰胺柱→先用30ml蒸餾水洗脫,棄去洗脫液→再用70%乙醇洗脫,收集乙醇液,定容于50ml 的容量瓶中,即為樣品供試液。在200~400nm范圍內(nèi)自動(dòng)掃描(△λ= 2nm),以一階導(dǎo)數(shù)峰~谷法(262~276nm) 的振幅值(D)為定量依據(jù)測(cè)定含量。