根據(jù)塔板理論,色譜峰應(yīng)該是正態(tài)分布曲線。但理論是理論,真實(shí)的色譜峰形很少是正態(tài)分布的,而是各種形狀。其實(shí)相對(duì)峰型更關(guān)注的是峰面積,此時(shí)就會(huì)出現(xiàn)峰寬問(wèn)題。峰形狀變了,峰寬加大了,經(jīng)常造成分離度下降,分不開(kāi)了,而且拖尾嚴(yán)重,積分不好了,也影響定量。
一張譜圖上,先出來(lái)的峰和后面出來(lái)的峰一樣寬,為什么中間卻有兩個(gè)大峰非常寬呢?為什么有的峰拖尾了,峰寬變的大很多呢?這是因?yàn)樯V峰寬是由很多因素構(gòu)成的,每個(gè)因素影響程度不同,造成的結(jié)果也不同,誰(shuí)的影響力大,就主要顯示誰(shuí)的作用結(jié)果。
那么色譜峰寬,到底由哪幾部分構(gòu)成?色譜峰寬由兩部分構(gòu)成:一是對(duì)稱峰寬,二是拖尾峰寬。所謂對(duì)稱峰寬,就是指這種峰寬不會(huì)造成峰型不對(duì)稱,不會(huì)出現(xiàn)拖尾前伸。而拖尾峰寬,就是指這個(gè)峰寬構(gòu)成,會(huì)導(dǎo)致峰形狀變的不對(duì)稱。首先要研究的是對(duì)稱峰寬,這個(gè)導(dǎo)致了峰寬的主要構(gòu)成。
對(duì)稱峰寬主要包括兩部分:1、塔板理論正常展寬。2、正常進(jìn)樣峰展寬。
1、塔板理論正常展寬
根據(jù)塔板理論,進(jìn)樣時(shí)處于0號(hào)塔板的組分,離開(kāi)色譜柱時(shí)已經(jīng)占據(jù)了很多塊塔板,導(dǎo)致峰寬加大,并形成正態(tài)分布的峰型。
2、正常的進(jìn)樣展寬
根據(jù)塔板理論,樣品進(jìn)樣時(shí)都停留在0號(hào)塔板上,但這是不可能的。因?yàn)橐粋(gè)塔板的體積是如此的小,以至于根本放不下襯管里面哪怕是經(jīng)過(guò)分流之后的樣品。比如你的襯管有0.5ml,分流比50倍,那么進(jìn)入色譜柱的體積大約有10立方毫米。但你的毛細(xì)管柱內(nèi)徑如果是0.53mm的,這些樣品都進(jìn)去,也要占據(jù)大約50mm長(zhǎng)的柱子。也就是說(shuō),0號(hào)塔板放不下,要放到100塊塔板了。但不是說(shuō)進(jìn)樣寬度就是100塊塔板了,進(jìn)樣寬度是這個(gè)數(shù)值除以分配比k之后的塔板數(shù)。為什么要除以分配比?因?yàn)樯V柱固定相可以溶解很多樣品中待測(cè)組分,所以待測(cè)組分在這100塊板上濃度不同,只有前面1/k的塔板上濃度比較高。
(內(nèi)容參考?xì)庀嗌V之家)
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