光是一種電磁波,具有一定的波長和頻率�？梢姽獾牟ㄩL范圍在400~760nm，紫外光為200~400nm，紅外光為760~500000nm�？梢姽庖虿ㄩL不同呈現(xiàn)不同顏色，這些波長在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發(fā)出的白光是復(fù)合光，是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等，這就是光譜。有色物質(zhì)溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現(xiàn)不同顏色，而某些無色物質(zhì)能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質(zhì)吸收由光源發(fā)出的某些波長的光可形成吸收光譜，由于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，對(duì)光的吸收能力不同，可見分光光度計(jì)因此每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質(zhì)的濃度成正比，分光光度法就是利用物質(zhì)的這種吸收特征對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法。
在比色分析中，有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強(qiáng)度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度。當(dāng)一束單色光照射溶液時(shí)，入射光強(qiáng)度愈強(qiáng)，溶液濃度愈大，液層厚度愈厚，溶液對(duì)光的吸收愈多，它們之間的關(guān)系，符合物質(zhì)對(duì)光吸收的定量定律，即Lambert-Bear 定律。這就是分光光度法用于物質(zhì)定量分析的理論依據(jù)。
可見分光光度計(jì)注意事項(xiàng)
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
可見分光光度計(jì)
721可見分光光度計(jì)其波長范圍360～800nm，色散元件為三角棱形.
1.檢查儀器各調(diào)節(jié)鈕的起始位置是否正確，接通電源開關(guān)，打開樣品室暗箱蓋，使電表指針處于“0”位，預(yù)熱20min后，再選擇須用的單色光波長和相應(yīng)的放大靈敏度檔，用調(diào)“0”電位器調(diào)整電表為T=0％。
2.蓋上樣品室蓋使光電管受光，推動(dòng)試樣架拉手，可見分光光度計(jì)使參比溶液池（溶液裝入4／5高度，置第一格）置于光路上，調(diào)節(jié)100％透射比調(diào)節(jié)器，使電表指針指T＝100％。
3.重復(fù)進(jìn)行打開樣品室蓋，調(diào)0，蓋上樣品室蓋，調(diào)透射比為100％的操作至儀器穩(wěn)定。
4.蓋上樣品室蓋，推動(dòng)試樣架拉手，使樣品溶液池置于光路上，讀出吸光度值。讀數(shù)后應(yīng)立即打開樣品室蓋。
5.測量完畢，取出比色皿，洗凈后倒置于濾紙上晾干。各旋鈕置于原來位置，電源開關(guān)置于“關(guān)”，拔下電源插頭。
6.可見分光光度計(jì)放大器各檔的靈敏度為：“l(fā)” ×1倍；“2”×10倍；“3”×20倍，靈敏度依次增大。由于單色光波長不同時(shí)，光能量不同，需選不同的靈敏度檔。選擇原則是在能使參比溶液調(diào)到T＝ 100％處時(shí)，盡量使用靈敏度較低的檔，以提高儀器的穩(wěn)定性。改變靈敏度檔后，應(yīng)重新調(diào)“0”和“100”。
