關(guān)鍵詞
氣相色譜法；牛奶；雙甲脒；2,4-二甲基苯胺
目標(biāo)
建立高效的氣相色譜檢測(cè)方法，靈敏、快速測(cè)定牛奶中的雙甲脒及其代謝物的含量牛奶中的雙甲脒及其代謝物在酸性條件下水解為2,4-二甲基苯胺，正己烷提取后，經(jīng)過衍生，氣相色譜儀分析方法檢出限遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的雙甲脒最大殘留限量0.05mg/kg
引言
雙甲脒是一種廣譜性的殺螨劑，曾在國(guó)內(nèi)外被大量使用，研究發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物2,4-二甲基苯胺具有致癌作用，并且雙甲脒可通過食物鏈的傳遞，吸入、攝入或經(jīng)皮膚吸收后會(huì)引起中毒，對(duì)人體造成潛在的致癌危險(xiǎn)。因此，我國(guó)農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部發(fā)布的《農(nóng)藥安全使用規(guī)定》將它列為高毒殺螨劑，明確規(guī)定禁止使用，CAC和EU也禁止其使用。
目前，雙甲脒殘留量測(cè)定方法有氣相色譜法、液相色譜法。以液相色譜法直接測(cè)定雙甲脒母體含量，此方法忽視了雙甲脒在酸性條件下會(huì)分解成2,4-二甲基苯胺的特性，只測(cè)定雙甲脒母體含量作為雙甲脒的總殘留量是不科學(xué)的。2014年新頒布的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中GB29707-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)牛奶中雙甲脒殘留標(biāo)志物殘留量的測(cè)定氣相色譜法》就是用氣相色譜法檢測(cè)牛奶中的雙甲脒及其代謝物殘留量。
本方法在此標(biāo)準(zhǔn)方法的基礎(chǔ)上做了改進(jìn)，將牛奶中的雙甲脒在酸性條件下水解為2,4-二甲基苯胺，用七氟丁酸酐衍生，氣相色譜法進(jìn)行定量，結(jié)果是雙甲脒和其代謝產(chǎn)物的總殘留量。方法操作簡(jiǎn)單，檢出限遠(yuǎn)低于食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的雙甲脒最大殘留限量0.05mg/kg。
儀器
氣相色譜儀，配ECD檢測(cè)器；
自動(dòng)進(jìn)樣器
恒溫干燥箱
離心機(jī)
天平
漩渦混合器
耗材
色譜柱：（30m×0.25mm×0.25μm）
試劑與標(biāo)準(zhǔn)品
雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99%；2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥95%
氫氧化鈉：優(yōu)級(jí)純；鹽酸：優(yōu)級(jí)純；無水硫酸鈉：優(yōu)級(jí)純，450℃灼燒后使用；碳酸氫鈉：優(yōu)級(jí)純；正己烷：色譜純
1mol/L鹽酸溶液：取濃鹽酸8.3mL，用水稀釋定容至100mL
4mol/L氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉16克，用水溶解并定容至100mL
飽和碳酸氫鈉溶液：稱取碳酸氫鈉9.6克，溶于100mL水中
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取10.0mg雙甲脒和2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解稀釋并定容至100mL，得到100mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存在冰箱中備用。
標(biāo)準(zhǔn)中間液：雙甲脒和2,4-二甲基苯胺儲(chǔ)備液分別移取1mL，用正己烷稀釋定容至100mL，得濃度為1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液。
樣品前處理
稱取牛奶樣品5.0克于50mL離心管中，加入1mol/L鹽酸溶液10mL，于60℃恒溫干燥箱中靜置30min，冷卻，10000rpm離心10min，取上清液于另一離心管中，加入4mol/L氫氧化鈉溶液10mL，正己烷5mL，漩渦混勻，靜置5min，10000rpm離心10min，取上層正己烷液2mL于溫90min，期間每隔30min取出超聲5min。衍生后靜置10min，加飽和碳酸氫鈉溶液2mL，混勻，取有機(jī)相層，加入無水硫酸鈉1g去除水分，供氣相色譜測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)條件
色譜柱：（30m×0.25mm×0.25μm）；
柱溫：50℃（1min），10℃/min到250℃（5min）；
進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣，不分流時(shí)間為1min；進(jìn)樣量：1μL；
進(jìn)樣口溫度：260℃；
載氣：高純氮?dú)猓?9.999%），恒流模式，1mL/min；
檢測(cè)器溫度：300℃，尾吹氣，氮?dú)猓?5mL/min。
結(jié)果與討論
前處理?xiàng)l件的優(yōu)化：雙甲脒在酸性條件下水解較快并且水解較徹底，水解生成的2,4-二甲基苯胺為堿性化合物，在酸性條件下與酸成鹽，溶于水，在堿性條件下，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑。因此水解后，加入堿性溶液再加入正己烷提取。正己烷提取液經(jīng)七氟丁酸酐衍生后生成2，4-二甲基苯七氟丁酰胺測(cè)定。
在選定的色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)品衍生后的色譜圖見圖1另一離心管中，加七氟丁酸酐10μL，混勻，于60℃恒線性關(guān)系及測(cè)定低限：準(zhǔn)確移取2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)中間液適量，用正己烷稀釋，分別配制得到濃度為0、5、10、20、50、100μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，各取2.0mL，按衍生化步驟處理，供氣相色譜測(cè)定。以測(cè)定峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。方法檢出限以3倍信噪比計(jì)算得到，本方法的測(cè)定低限為2μg/kg。
結(jié)論
樣品中的雙甲脒在酸性條件下水解為2,4-二甲基苯胺，堿化后用正己烷提取，衍生后采用賽默飛世爾新型的氣相色譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，雙甲脒的平均回收率為84.1-87.3%，3次平行測(cè)定的RSD值≤5.96%，方法測(cè)定低限為2ng/g。此法操作簡(jiǎn)單，科學(xué)準(zhǔn)確，靈敏度高，能夠滿足牛奶中雙甲脒的殘留分析要求。
