熒光分光光度計(jì)測(cè)試需要的幾大步驟：
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo)，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測(cè)定。
(二)操作步驟
1.開(kāi)機(jī)：接通電源，打開(kāi)主機(jī)開(kāi)關(guān)，點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后，根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。
2.檢測(cè)前準(zhǔn)備：參照儀器說(shuō)明書(shū)，在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等)。
4.基本測(cè)定
(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長(zhǎng)，找到maxλem，以此為發(fā)射波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。
(2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長(zhǎng)，找到maxλex，以此為激發(fā)波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測(cè)定
設(shè)置熒光分光光度計(jì)參數(shù)，選擇合適的工作方式，測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來(lái)，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng)，得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值，即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測(cè)量參數(shù)，設(shè)置λex、λem，采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式，即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測(cè)定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測(cè)定條件下，設(shè)置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計(jì)算顯示。
3.定量測(cè)試：在相同的測(cè)定條件下，測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定后，由工作曲線求出該溶液的濃度。
