一、概述
米醋的主要成分為醋酸，此外還有少量的其他弱酸。要測(cè)定其總酸度，我們可以用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，用酚酞作指示劑，從而測(cè)得其總酸度。
對(duì)于氨基酸氮含量的測(cè)定，主要有4種方法：
（1）我們先是使-NH2與甲醛結(jié)合，其堿性消失，破壞內(nèi)鹽的存在，就可以用堿來(lái)滴定-COOH基，以間接方法測(cè)定氨基酸的量。由于米醋中氨基酸的含量比較少，所以測(cè)出的結(jié)果準(zhǔn)確度較低，選擇性較差，滴定終點(diǎn)不易掌握，結(jié)果不夠理想，而且甲醛會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。
（2）把氨基酸中的-NH2轉(zhuǎn)化成NH4+，因NH4+的酸性太弱，不能用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液直接測(cè)定，所以用甲醛法進(jìn)行測(cè)定NH4+。
⑶氨基酸氮的測(cè)定還可以利用Hantzsh反應(yīng)原理，用乙酰丙酮—甲醛混合溶液作為氨基酸的衍生物，采用吸光度法測(cè)定食醋中氨基酸態(tài)氮的含量。
⑷電位滴定法根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計(jì)的玻璃電極及甘汞電極（或復(fù)合電極）插入被測(cè)液中構(gòu)成電池，用堿液滴定，根據(jù)酸度計(jì)指示的pH值判斷和控制滴定終點(diǎn)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1、關(guān)于總酸量的測(cè)定
醋酸為有機(jī)弱酸（Ka=1.8×10-5）, 與NaOH反應(yīng)式如下：HAc+ NaOH = NaAc + H2O
反應(yīng)產(chǎn)物為強(qiáng)堿弱酸鹽，滴定突躍在堿性范圍內(nèi)，可選用酚酞等堿性范圍變化的指示劑。
食用米醋中的主要成分是醋酸，其總酸度用HAc的含量來(lái)表示。
2、關(guān)于食醋中氨基酸含氮量的測(cè)定
（1）用甲醛法測(cè)氨基酸含氮量
氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì)，因?yàn)榘被岷?COOH基顯示酸性，又含有-NH2基顯示堿性。由于這兩個(gè)基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時(shí)，-NH2與甲醛結(jié)合，其堿性消失，破壞內(nèi)鹽的存在，就可用堿來(lái)滴定-COOH基，以間接方法測(cè)定氨基酸的含氮量。用堿完全中和-COOH基時(shí)的PH值為8.4~9.2，可用酚酞作為指示劑，NaOH作為滴定劑。
氨基酸態(tài)氮含量=（N×V×0.014×100%）/W，其中N：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡；V：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量(m1)；W：樣品溶液相當(dāng)樣品重量(克)；0.014：氮的毫克當(dāng)量。
（2）用吸光度法測(cè)氨基酸含氮量
β-二酮與甲醛的混合試劑與α-氨基酸具有非常靈敏的顯色反應(yīng)。根據(jù)Hantzsch反應(yīng)原理，認(rèn)為顯色產(chǎn)物為3，5-二乙酰-2，6-二甲基-1，4-二氫化吡啶羰酸衍生物。
三、所需儀器、試劑的計(jì)劃用量及配制方法
儀器：
1.臺(tái)秤 2.島津電子分析天平 3.錐形瓶 4.鐵架臺(tái) 5.移液管 6.燒杯 7.堿式滴定管 8.容量瓶 9.塑料試劑瓶 10.稱(chēng)量瓶 11.量筒 12.酒精燈 13.可見(jiàn)分光光度計(jì)
試劑：
1、NaOH溶液 0.1mol/L 用燒杯在天平上稱(chēng)取4g固體NaOH，加入新鮮的或煮沸的除去CO2的蒸餾水，溶解完全后，轉(zhuǎn)入帶橡皮的試劑瓶中，加水稀釋至1L，充分搖勻。
2、酚酞指示劑 2g/L乙醇溶液。
3、鄰苯二甲酸氫鉀（KHC8H4O4）基準(zhǔn)物質(zhì) 在100—125℃干燥1h后，置于干燥器中備用。
4、食用醋酸試樣。
5、中性甲醛溶液18%(1+1)。
6、氨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)量105℃干燥2h的分析純硫酸銨0.0472克于100mL容量瓶中，混勻，用水稀釋成1mg/L。
7、顯色劑：15mL37%甲醛和7.8 mL乙酰丙酮混合，加水至100 mL。
8、緩沖溶液： pH=4.7的NaAc-HAc緩沖溶液，取NaAc83g溶于水加冰醋酸60mL稀釋至1L。
9、百里酚藍(lán)指示劑。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、0.1 mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的標(biāo)定
在稱(chēng)量瓶中以差減法稱(chēng)量KHP3份，每份0.4—0.5g,,分別倒入2—3滴酚酞指示劑，加入40—50mL蒸餾水，待試劑完全溶解后，加入2—3滴酚酞指示劑，用待標(biāo)定的NaOH溶液滴定至微紅色并保持半分鐘即為終點(diǎn)，計(jì)算NaOH溶液的濃度和各次標(biāo)定結(jié)果的相對(duì)偏差。
2、食用米醋中總酸量的測(cè)定
用移液管移取食醋試樣20.00mL于100.0mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋、定容，搖勻。用移液管移取食醋稀釋液20.00mL于250mL錐形瓶中，加入25mL蒸餾水，2滴酚酞指示劑，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由無(wú)色變?yōu)槲⒓t，30s不褪色即為終點(diǎn)，記錄消耗NaOH的體積（平行做3次，相對(duì)平均偏差應(yīng)小于0.2%）。根據(jù)NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和滴定時(shí)消耗的體積（V），可計(jì)算出食醋中總酸量。
3、甲醛溶液的處理
甲醛中常含有微量酸，應(yīng)事先中和。其方法如下：取原瓶裝甲醛上層清液于燒杯中，加水稀釋一倍，加入2～３滴酚酞指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定甲醛溶液至呈現(xiàn)微紅色。
4、食用米醋中氨基酸含氮量測(cè)定
用移液管取1.00ml上述實(shí)驗(yàn)中的 NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液于100ml的容量瓶中、定容、待用。
（1）甲醛法測(cè)定
0ml的待測(cè)溶液，加入2滴酚酞指示劑，用 NaOH滴加到剛好顏色變成粉紅色30秒內(nèi)顏色不變化，加入甲醛溶液10mL，再加入百里酚藍(lán)指示劑10滴，用0.001mol/L的 NaOH滴定至藍(lán)紫色，30s內(nèi)不褪色為終點(diǎn)，記錄加入甲醛后消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)。
⑵用吸光度法測(cè)定
①吸收曲線(xiàn)的制作和測(cè)量波長(zhǎng)的選擇
用吸量管吸取0.0mL和1.0mL氨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入兩個(gè)50mL容量瓶中，各加入20.0mL緩沖溶液，20.0mL顯色劑，水稀釋到刻度，混勻。于100℃水浴中加熱15min，取出用冷水冷卻到室溫，移入1cm比色皿，以試劑空白為參比，在360—460nm之間，每隔5nm測(cè)一次吸光度，在坐標(biāo)紙上，以波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制A與λ關(guān)系的吸收曲線(xiàn)，從吸收曲線(xiàn)上選擇測(cè)定N的適宜波長(zhǎng)，一般選用最大吸收波長(zhǎng)。
②標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
在7個(gè)50mL的容量瓶中，用移液管分別加入0mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL1mg/L氨氮溶液，均加入20mL緩沖溶液，20mL顯色劑，搖勻，再用水稀釋到刻度，搖勻。于100℃水浴中加熱15min,取出用冷水冷卻到室溫。用1cm比色皿，以試劑為參比溶液，在所選擇的波長(zhǎng)下，測(cè)量各溶液的吸光度。以含N量為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
③食用米醋中氨基酸含氮量測(cè)定
用移液管準(zhǔn)確吸取適量待測(cè)液10mL于50mL容量瓶（或比色皿）中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作步驟，加入各種試劑，測(cè)量吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出和計(jì)算試液中鐵的含量（單位為μg/mL）
文章參考：中國(guó)化工儀器網(wǎng)
