1、原理
本法為重量法,用脂肪溶劑將脂肪提出后進(jìn)行稱量,該法適用于固體和液體樣品。通常將樣品浸于脂肪溶劑,為乙醚或沸點(diǎn)30℃至60℃的石油醚,借助于索氏提取器進(jìn)行循環(huán)抽提。用本法提取的脂肪性物質(zhì)為脂肪類物質(zhì)的混合物,其中含有脂肪游離脂肪酸、磷脂\酯、固醇、芳香油某些色素及有機(jī)酸等。因此,稱為粗脂肪。
2、試劑及儀器
(1)無水乙醚
(2)海砂
(3)索氏提取器
(4)恒溫水浴鍋
(5)烘箱
(6)脫脂棉花
(7)脫脂濾紙
3、操作步驟
(一)樣品的準(zhǔn)備
稱取樣品的重量根據(jù)材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在10%以下的,稱取樣品10-12克;脂肪含量為50-60%的,則稱取樣品2-4克,(可以用測定水分后的樣品)。
將樣品在80-100℃烘箱去水分。一般烘4小時,烘干時要避免過熱。冷卻后,準(zhǔn)確地稱取一定量樣品,必要時,拌以精制海砂,無損地移入濾紙筒內(nèi),用脫脂棉塞嚴(yán),將濾紙筒放人索氏提取器的提取管內(nèi),注意勿使濾紙筒高于提取管的虹吸部分。
(二)抽取
將洗凈的提取瓶在1.5℃烘箱內(nèi)烘干至恒重,加乙醚約達(dá)到提取瓶容積的1/2-2/3,然后將提取器各部分按圖連接,注意不能漏氣。
加熱提取時,應(yīng)在電熱恒溫水浴中進(jìn)行(水浴溫度約為40-50℃)也可以使用燈泡或電爐加熱的水浴鍋,嚴(yán)禁用火焰直接加熱索氏提取器。
在加熱時乙醚蒸發(fā),乙醚蒸汽由連接管上升至冷凝器,凝結(jié)成液體滴入提取管中,此時樣品內(nèi)的脂肪為乙醚液面超過虹吸管高度后溶有脂肪的乙醚虹吸管流入提取瓶,為此循環(huán)抽提,調(diào)解水域溫度,使乙醚每小時循環(huán)3-5次,提出時間視樣品的性質(zhì)而定,一般需6-12小時,樣品含有脂肪是否提取完全,可以用濾紙來粗略判斷,從提取管內(nèi)吸取少量的乙醚并滴在凈的濾紙上,待乙醚干后,濾紙上不留有油脂的半點(diǎn)則表示已經(jīng)提取完全。
提取完全后,再將乙醚蒸到提取管內(nèi),待乙醚液面達(dá)到虹吸管的最高處以前,取下提取管。
4、稱重和計算
將提取瓶中的乙醚全部蒸干,洗凈外壁,置于105℃烘箱干燥至恒重,按下式計算樣品的促脂肪百分含量。
脂肪(﹪)=( W1-W0)/W×100
W1:接受瓶和脂肪重量(克)。
W:樣品重量(克)。
W0:接受瓶重量(克)。
5、注意事項
(1)樣品應(yīng)干燥后研細(xì),裝樣品的濾紙筒一定要緊密,不能往外漏樣品,否則重做。
(2)放入濾紙筒的高度不能超過回流彎管,否則乙醚不易穿透樣品,脂肪不能全部提出,造成誤差。
(3)碰到含多量糖及糊精的樣品,要先以冷水處理,等其干燥后聯(lián)通濾紙一起放入提取器內(nèi)。
(4)提取時水浴溫度不能過高,一般使乙醚剛開始沸騰即可(約45℃左右)。回流速度以每8-12次/時為宜。
(5)所用乙醚必須是無水乙醚,如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機(jī)物抽出,造成誤差。
(6)用于樣品測定脂肪,可按下式計算原來樣品脂肪的含量.
脂肪(﹪)=( W1-W0)/W*(100-A)
脂肪(%)= 物的耐鹽性得到不同程度提高。其中Zhang和Blumwald(2001)、Zhang等(2001)報告的轉(zhuǎn)AtNHX1基因番茄可耐200mmol/L的氯化鈉,并把吸收的鈉鹽積累在葉片中,而果實的品質(zhì)不受影響。這些研究預(yù)示著在提高植物耐鹽性方面,離子的選擇吸收和跨膜運(yùn)輸?shù)幕蚬こ淌侵参锬望}性種質(zhì)改良的有效途徑。
(7)冷凝管上端最好連接一個氯化鈣干燥管,這樣不僅可以防止空氣中水分進(jìn)入,而且還可以避免乙醚揮發(fā)在空氣中,這樣可防止實驗室微小環(huán)境空氣的污染。如無此裝置,塞一團(tuán)干脫脂棉球亦可。
(8)如果沒有無水乙醚可以自己制備,制備方法如下:在1000毫升乙醚中,加入無水石膏50克,振搖數(shù)次,靜置1 0小時以上蒸餾,收集35℃以下的餾液,即可應(yīng)用。
(9)將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時,瓶口向一側(cè)傾斜45℃放置使揮發(fā)物乙醚易與空氣形成對流,這樣干燥迅速。
(10)樣品及醚提出物在烘箱內(nèi)烘干時間不要過長,因為一些很不飽和的脂肪酸,容易在加熱過程中被氧化成不溶于乙醚的物質(zhì);中等不飽和脂肪酸,受熱容易被氧化而增加重量.在沒有真空干燥箱的條件下,可以在100-105℃干燥1.5-3小時。
(11)如果沒有乙醚或無水乙醚時,可以用石油醚提取,石油醚沸點(diǎn)30-60℃為好。
(12)使用揮發(fā)乙醚或石油醚時,切忌用直接火加熱。應(yīng)用電熱套電水浴,電燈泡等.