本文主要介紹高效液相色譜儀常見的有關(guān)峰的問題，可能的原因及解決辦法。
1、出現(xiàn)肩峰或分叉
①樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ；
②樣品溶劑過強－－采用較弱的樣品溶劑；
③柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品；
⑤進樣器損壞－－更換進樣器轉(zhuǎn)子。
2、出現(xiàn)鬼峰
①進樣閥殘余峰－－每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗；
②樣品中未知物－－處理樣品；
③柱未平衡－－重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）；
④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑 ；
⑤水污染（反相）－－通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水 。
3、出現(xiàn)峰拖尾
①柱超載－－降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相；
②峰干擾－－清潔樣品,調(diào)整流動相；
③硅羥基作用－－加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,純化樣品 ；
④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 ；
⑤柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
⑥死體積或柱外體積過大－－連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細內(nèi)徑的連接管 ；
⑦柱效下降－－用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。
4、使峰位發(fā)生重排
在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發(fā)生峰位的重排。
下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動相中換了強溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。
5、出現(xiàn)峰展寬
①樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ；
②在進樣閥中造成峰擴展－－進樣前后排出氣泡以降低擴散 ；
③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點 ；
④檢測器時間常數(shù)過大－－設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% ；
⑤流動相粘度過高－－增加柱溫,采用低粘度流動相；
⑥檢測池體積過大－－用小體積池,卸下熱交換器；
⑦保留時間過長－－等度洗脫時增加強溶劑含量,也可用梯度洗脫；
⑧柱外體積過大－－將連接管徑和連接管長度降至最��；
⑨樣品過載－－進小濃度小體積樣品 。
6、出現(xiàn)倒峰
所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進在此波長下沒有吸收或吸收低于流動相的溶液，在流動相中會出現(xiàn)洞穴，通過柱后出現(xiàn)倒峰。
7、出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰
用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。
應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A最好用流動相溶解樣品進樣。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進樣，主要缺點是每次進樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負峰，有時還波及到樣品峰。C需要時用強溶劑溶解進樣。
8、前延峰的發(fā)生及處理
因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。在離子對色譜中，前延峰的另一個原因是用非流動相作樣品溶劑。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進樣量不要太大，否則會導致前延峰或其它問題。在RP-HPLC中樣品溶液的強度大于流動相引起前延峰。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應(yīng)。此外使用流動相溶解樣品是解決的最簡單實用的方法。
9、峰變寬的原因
A、在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效。
B、柱外峰寬效應(yīng)。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應(yīng)
C、化學效應(yīng)，多數(shù)是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。
