HPLC(High Performance LiquidChromatography),高效液相色譜儀。但是HPLC的最初涵義是高壓液相色譜,P表示壓力Pressure。那為什么會(huì)有這樣的轉(zhuǎn)變呢?本文主要說(shuō)明液相色譜的泵。
從俄國(guó)科學(xué)家茨維特第一次命名色譜法,到1960年代液相色譜儀初現(xiàn)雛形,整整用了50年。最大的難題在于液相高壓泵的設(shè)計(jì),要如何將流動(dòng)相可控的輸送到色譜柱里。既要穩(wěn)定持續(xù),又要密封耐壓,這樣才能保證實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。
一、液相色譜泵的原理
從隔膜泵到往復(fù)活塞泵,發(fā)展到現(xiàn)在,幾乎所有的液相泵系統(tǒng)都是往復(fù)活塞泵的某種變形了。那它是什么原理呢?
在節(jié)日里,吹氣球的打氣筒就是一個(gè)活塞泵。包括一根活塞,兩個(gè)有方向的閥門,還有一個(gè)腔體;钊蚝罄蚯惑w里吸氣,活塞向前推,向外均勻的排氣。
液相泵也是一樣,有柱塞桿,也就是活塞,有單向閥,也就是有方向的閥門,還有泵腔。柱塞桿往后拉,溶液從入口閥進(jìn)入泵腔里。向前推,泵腔里的液體就會(huì)從出口閥排出腔外。不過(guò)手動(dòng)拉活塞可不行,所以還得配一個(gè)泵驅(qū)動(dòng),自動(dòng)控制活塞運(yùn)動(dòng),帶動(dòng)著活塞一前一后的排液和吸液。不過(guò),這種方式,就像吹氣球一樣,吹一下,停一下,是不符合液相色譜要求的。因此需要兩個(gè)活塞互補(bǔ)工作,才能實(shí)現(xiàn)連續(xù)的液體輸出。
二、二元泵和四元泵
要改變流速的大小,只要改變柱塞桿運(yùn)動(dòng)的快慢就可以了。這樣的一整套,被稱為一個(gè)泵頭。一個(gè)泵頭可以穩(wěn)定輸出一種液體,叫做單元泵。如果配兩個(gè)泵頭,就可以控制兩種液體的流量和混合,叫做二元泵。
那什么是四元泵呢?四元泵其實(shí)也只有一個(gè)泵頭,它是在單元泵的基礎(chǔ)上加了一個(gè)四元比例閥。大家有觀察過(guò)浴室里的水龍頭嗎?有些設(shè)計(jì)是一個(gè)冷水開關(guān),一個(gè)熱水開關(guān),分別控制大小,來(lái)改變混合之后的溫度和流量,這就像二元泵,這種方式的混合點(diǎn)在泵頭的后面,被稱為泵后混合。另一種是通過(guò)比例閥來(lái)控制冷熱水進(jìn)入的比例,只有一個(gè)開關(guān)來(lái)控制最終的流量,這就像是四元泵,這種方式的混合點(diǎn)在比例閥里,也就是泵頭的前面,被稱為泵前混合。其中的四元比例閥負(fù)責(zé)控制溶劑的比例,當(dāng)比例變化時(shí),改變的并不是閥開的大小,而是在每種溶劑上開的時(shí)間。比如方法是20%的水和80%的甲醇,比例閥就會(huì)像紅綠燈一樣不斷的切換,按照2:8的比例把綠燈時(shí)間分別分配給水相和甲醇。
由于設(shè)計(jì)上先天的差異,二元泵和四元泵的使用特點(diǎn)和故障排查都不太一樣。二元泵的優(yōu)點(diǎn)是有兩個(gè)泵頭,分別控制A和B的流量,再進(jìn)行混合,由于泵頭的精度高,混合比例的精度也會(huì)比較高。四元泵可以使用四種溶劑,靈活方便。但四元泵只有一個(gè)泵頭,混合是依靠比例閥的開合,所以混合精度會(huì)稍差一些。
最后,總結(jié)一下,泵的結(jié)構(gòu)和分類有單元泵、二元泵和四元泵。還可以分為分析泵和制備泵。
三、液相色譜泵的維護(hù)
在使用儀器的時(shí)候,泵里的很多部件一直處于運(yùn)動(dòng)或者變化的狀態(tài)。比如泵腔里的柱塞桿,不停開啟閉合的單向閥,還有算著時(shí)間做切換的四元比例閥。就像鞋子里不能有沙子一樣,運(yùn)動(dòng)的零件都特別需要避免顆粒的磨損。
固體小顆粒會(huì)加速柱塞桿的磨損,導(dǎo)致漏液;阻礙單向閥的閉合,導(dǎo)致基線的波動(dòng);
顆粒的存在還會(huì)影響比例閥的準(zhǔn)確性。這也是為什么液相實(shí)驗(yàn)需要過(guò)濾流動(dòng)相的原因之一,尤其是使用緩沖鹽的實(shí)驗(yàn)。
另外,由于設(shè)計(jì)的原因,四元泵更有可能在工作中產(chǎn)生緩沖鹽的析出,形成新的顆粒。因此,需要更加注意。