一、關(guān)于能力驗(yàn)證的介紹
能力驗(yàn)證是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)來(lái)確定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的活動(dòng)，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室開展能力驗(yàn)證的室間比對(duì)是計(jì)量認(rèn)證和國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的特定要求，為進(jìn)一步加強(qiáng)農(nóng)業(yè)系統(tǒng)質(zhì)檢機(jī)構(gòu)能力建設(shè)，全面提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)技術(shù)水平和整體素質(zhì).
根據(jù)《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)考核方法》和《農(nóng)業(yè)部產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試機(jī)構(gòu)管理辦法》等有關(guān)規(guī)定，每年農(nóng)業(yè)部或省農(nóng)業(yè)廳都會(huì)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行能力驗(yàn)證。
通過(guò)能力驗(yàn)證，可使實(shí)驗(yàn)室了解分析項(xiàng)目的整體水平和自己所處的位置，有利于找差距，進(jìn)一步提高自身技術(shù)能力和管理水平。可用于識(shí)別實(shí)驗(yàn)室存在的內(nèi)存問(wèn)題，及時(shí)發(fā)現(xiàn)自身的不足并加以改進(jìn)。
二、驗(yàn)證實(shí)例介紹
本文主要介紹某農(nóng)產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室參加省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢中心組織的蔬菜中農(nóng)藥殘留定性定量檢測(cè)能力驗(yàn)證的實(shí)例。
1、材料與方法
1.1檢測(cè)樣品
本次能力驗(yàn)證發(fā)放的樣品為已破碎蔬菜樣品，由省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢中心統(tǒng)一加入農(nóng)藥標(biāo)液，對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)放了三個(gè)蔬菜樣品，一個(gè)空白樣品，兩個(gè)平行樣品。每個(gè)樣品均25g。
1.2儀器及試劑
氣相色譜儀，PFPD、ECD檢測(cè)器，高速分散均質(zhì)機(jī)、氮吹儀、快速混勻器。
乙腈（色譜純）、正已烷（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）。
1.3檢測(cè)方法
本次能力驗(yàn)證活動(dòng)為了能準(zhǔn)確了解參加實(shí)驗(yàn)室農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的實(shí)際能力狀況，對(duì)檢測(cè)方法作了統(tǒng)一要求，均采用《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法》進(jìn)行檢測(cè)。
1.4檢測(cè)項(xiàng)目
甲胺磷、氧樂(lè)果、甲拌磷、對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、甲基異柳磷、水胺硫磷、樂(lè)果、敵敵畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、殺螟硫磷、二嗪磷、馬拉硫磷、亞胺硫磷、伏殺硫磷、辛硫磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰戊菊酯、三唑酮、百菌清、異菌脲、六六六共32種農(nóng)藥。
2、結(jié)果
2.1測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1
所測(cè)樣品值均為滿意結(jié)果，通過(guò)了能力驗(yàn)證。
2.2農(nóng)藥標(biāo)液與盲樣樣品色譜圖
3、討論
3.1儀器狀況與條件
氣相色譜儀的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性都會(huì)影響到分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。選擇合適的氣流、柱溫、進(jìn)樣口溫度、檢測(cè)器溫度、色譜柱等條件，才能使氣相色譜儀能夠得出更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
有機(jī)磷的檢測(cè)條件：色譜柱：VF-1701（30m×0.25mm×0.25um）；溫度：80℃保持1min，以20℃速度上升到130℃，再以5℃上升到200℃，再以15℃上升到250℃，保持11min。進(jìn)樣體積：1uL；進(jìn)樣品：250℃，不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器300℃；進(jìn)樣口溫度：250℃；氮?dú)饬魉伲?0mL/min；柱流速：2mL/min；空氣流速：17mL/min；氫氣流速14mL/min。
有機(jī)氯的檢測(cè)條件：色譜柱：VF-1ms（30m×0.32mm×0.25um）；溫度：80℃保持1min，以15℃速度上升到280℃,保持10.33min。進(jìn)樣體積：1uL；進(jìn)樣品：250℃，不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器300℃；進(jìn)樣口溫度：250℃，氮?dú)饬魉伲?0mL/min；柱流速：2mL/min。
檢測(cè)結(jié)果必須在領(lǐng)樣后72小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，在只有一臺(tái)氣相色譜儀的情況下，就需要時(shí)間上合理安排有機(jī)磷、有機(jī)氯的檢測(cè)，我們采用的方法，柱箱里安裝兩根色譜柱，將PFPD與ECD的檢測(cè)器、進(jìn)樣口同時(shí)升溫，在使用PFPD做有機(jī)磷時(shí)，ECD檢測(cè)器一直在預(yù)熱烘烤，有利于ECD的穩(wěn)定，當(dāng)有機(jī)磷做完，轉(zhuǎn)入ECD做有機(jī)氯，可立即進(jìn)樣，減少了更換色譜柱與檢測(cè)器后還需預(yù)熱的時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果可在48小時(shí)內(nèi)完成，能夠更快更準(zhǔn)確的完成檢測(cè)任務(wù)。
3.2容量器具及試劑純度
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及樣品制備過(guò)程中所使用的容量器具本身的準(zhǔn)確性，會(huì)直接影響到標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液配制濃度的準(zhǔn)確性。要對(duì)能力驗(yàn)證過(guò)程中使用的容量瓶、移液槍、大肚吸管、刻度吸管進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)，以確保移取和定容體積的準(zhǔn)確性。
所用的試劑如乙腈、正已烷、丙酮要使用色譜純，保證試劑無(wú)雜質(zhì)；所使用的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，要注意它的有效性，最好是臨用時(shí)打開安剖瓶里的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行配制，不要使用已打開時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，以防農(nóng)藥揮發(fā)，降低了濃度。
先將安瓿瓶?jī)?nèi)標(biāo)液100ug/mL稀釋成10ug/mL，將安瓿瓶?jī)?nèi)的標(biāo)液倒入10mL容量瓶中，用丙酮清洗安瓿瓶，并定容到刻度，混勻后倒入棕色樣品瓶中。存放于冰箱。
32種農(nóng)藥標(biāo)液都是這樣配制，然后再配制有機(jī)磷的混標(biāo)與有機(jī)氯的混標(biāo)。
3.3樣品前處理的注意事項(xiàng)
3.3.1要注意平行樣品的相對(duì)偏差，在樣品的前處理中注意以下細(xì)節(jié)，可使兩個(gè)平行樣品的相對(duì)偏差小于10%：
（1）是吸取或定容液體時(shí)要準(zhǔn)確，兩個(gè)平行樣品無(wú)差別；
（2）是在淋洗弗羅里析柱時(shí)，弗羅里析柱要使用同一廠家的，不同廠家的弗羅里析柱流速不同，所用淋洗液5mL要準(zhǔn)確，這樣可使弗羅里析柱的淋洗條件一樣；
（3）三是氮吹時(shí)，氣體流速快慢要盡量一致，使兩個(gè)平行樣氮吹濃縮條件一致；
3.3.2檢測(cè)方法中還要注意添加回收率試驗(yàn)，在拿到盲樣進(jìn)行前處理時(shí)，可自選一蔬菜樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，蔬菜樣品盡量選擇與盲樣樣品基質(zhì)一致的物質(zhì)，以保證比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3.4回收率
按試驗(yàn)方法對(duì)未有農(nóng)藥含量檢出的筍瓜樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2
所收到的盲樣樣品，一共3個(gè)，一個(gè)空白樣品，兩個(gè)平行樣品，平行樣品是25g，空白樣品多于25g。將樣品轉(zhuǎn)移至廣口瓶中，加50mL乙腈，過(guò)濾到裝有7-8g氯化鈉的具塞量筒中。振蕩兩分鐘，靜置30min。吸取10mL到刻度離心管中。
秘訣一：在一根針上氮吹，這樣可保證氣流穩(wěn)定，平行樣品相對(duì)偏差較小。
秘訣二：最后不要吹干，要留一滴在底部，兩個(gè)平行樣要吹得盡量一致，要瞪大眼睛看，一不留神就吹干了。將吹得近干的樣品加5mL丙酮定容，用一次性針管經(jīng)0.22um有機(jī)濾膜，倒入2mL樣品瓶中，至此樣品中有機(jī)磷前處理完畢。將氮吹過(guò)后的提取液加2mL正已烷，倒入弗羅里析柱，再用淋洗液淋洗，繼續(xù)氮吹，氮吹結(jié)果后，加5mL正已烷定容，倒入2mL樣品瓶上機(jī)測(cè)定。至此有機(jī)氯的前處理完成。
秘訣三：加標(biāo)回收----當(dāng)上述前處理完成后，將空白與樣品上機(jī)測(cè)試，很快可檢測(cè)出所加的農(nóng)藥品種與含量，但數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確呢？用加標(biāo)回收這個(gè)法寶，盲樣中空白樣品是多于25g，那么將多余的樣品稱取兩個(gè)10g，加入所測(cè)出的農(nóng)藥品種與含量，再進(jìn)行一遍前處理，上機(jī)測(cè)定，見(jiàn)表2回收率試驗(yàn)結(jié)果。這樣做的好處有兩個(gè)，一是不用猜測(cè)盲樣是什么樣品，再去找樣品，與盲樣保持相同的基質(zhì)。二是不用做空白，因?yàn)樗o你的是空白，直接加標(biāo)就行了。當(dāng)你看到加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，你就可以滿懷信心的報(bào)結(jié)果了。
4、小結(jié)
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制關(guān)鍵在于以下幾點(diǎn)：
一是要進(jìn)行充分的前期準(zhǔn)備工作，對(duì)所用的容量器具進(jìn)行校驗(yàn)，使用色譜純?cè)噭�，并進(jìn)行無(wú)雜質(zhì)峰出現(xiàn)試驗(yàn)。
二是要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。氣相色譜儀要選擇最佳工作條件，使32種農(nóng)藥能良好分離，峰型尖銳。
三是要進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，根據(jù)回收結(jié)果，來(lái)控制測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。只要真正做好以上幾點(diǎn)，就能對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留定性定量檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行有效控制，順利通過(guò)能力驗(yàn)證。
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