液相色譜法檢測(cè)含量是液相色譜儀分析工作的重要的一項(xiàng)，液相色譜法檢測(cè)含量用的基本是外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。其中外標(biāo)法檢測(cè)的準(zhǔn)確性受到更多因素的影響，更需要豐富的經(jīng)驗(yàn)來(lái)避免或減小誤差。
首先，我們來(lái)看看外標(biāo)法含量檢測(cè)的計(jì)算公式：
含量=m對(duì)*P*A樣*V樣/（m樣*A對(duì)*V對(duì)）*100%，
其中的任何一項(xiàng)發(fā)生了改變，都會(huì)使得檢測(cè)結(jié)果發(fā)生變化，而這其中的任何一項(xiàng)，都有很多種原因使其發(fā)生變化。下面逐一分析。
一、m對(duì)/m樣——對(duì)照品稱樣量/樣品稱樣量
1、天平是否經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)，其是否在正常工作狀態(tài)，稱量時(shí)天平是否帶有靜電，是否有空氣流動(dòng)，這些都是影響讀數(shù)的因素。
2、稱量方式采用的是加量法還是減量法，都是很有講究的。正常情況下，肯定要采用加量法，一次稱取到位，這樣才能得到準(zhǔn)確的稱樣量。
3、稱量操作稱量時(shí)，是否足夠小心，不會(huì)在轉(zhuǎn)移樣品時(shí)使樣品撒漏，這個(gè)是非常重要的。
4、樣品性質(zhì)。
樣品如果具有揮發(fā)性，直接稱樣時(shí)，必然會(huì)揮發(fā)一部分造成誤差；另外，如果樣品不穩(wěn)定，或在溶液中不穩(wěn)定，那么實(shí)際上來(lái)講，也是影響了樣品量。還有，樣品要保證均勻，固體不必說(shuō)，液體樣品要保證是均相，稱量之前要搖勻。
5、稱樣量。
對(duì)于萬(wàn)分之一天平，稱樣量最好能在100mg以上；對(duì)于十萬(wàn)分之一的天平，稱樣量應(yīng)在10mg以上。
二、P——對(duì)照品含量
1、對(duì)照品質(zhì)量對(duì)照品是否有合法來(lái)源，其含量值是否準(zhǔn)確。
2、對(duì)照品的保存對(duì)照品是否按要求保存，也是至關(guān)重要的。因?yàn)槿绻麑?duì)照品沒(méi)有按照規(guī)定保存，那么其右可能會(huì)發(fā)生降解，進(jìn)而影響含量值；另外，如果對(duì)照品是保存在冰箱中，稱量時(shí)，應(yīng)取出放在干燥器中回至室溫再稱量，否則其很有可能會(huì)吸收空氣中的水分，影響含量值。同理，如果對(duì)照品引濕性很強(qiáng)的話，長(zhǎng)期暴露在空氣中，也會(huì)使其P發(fā)生變化。
三、A樣/A對(duì)——樣品峰面積/對(duì)照品峰面積
1、方法的可靠性。
如果所用的分析方法可靠性不好，樣品峰面積或保留時(shí)間容易變化，那么檢測(cè)結(jié)果也是很重現(xiàn)性不好的。關(guān)于方法的可靠性，做過(guò)分析方法驗(yàn)證的人應(yīng)該都能明白，這里包括系統(tǒng)適用性、精密度、準(zhǔn)確性和耐用性以及線性等。
2、儀器進(jìn)樣精密度。
這其實(shí)可以包括在上述3.1因素中。
3、殘留或污染。
如果儀器系統(tǒng)被污染產(chǎn)生殘留，而本身峰面積就不大的情況下，這個(gè)因素產(chǎn)生的誤差就更明顯了。
4、積分。
如果樣品峰形不夠好，或者分離度不夠好的情況下，積分就很重要。
四、V樣/V對(duì)——樣品稀釋體積/對(duì)照品稀釋體積
1、容量瓶、移液管等體積是否準(zhǔn)確。
一般來(lái)說(shuō)，新買的容量瓶體積是符合要求的，但是也難免會(huì)買到個(gè)別次品，這就需要進(jìn)行校驗(yàn)了。
2、容量瓶、移液管規(guī)格。
這個(gè)是很重要的，一般大家都能注意這個(gè)問(wèn)題，做到合理使用。
3、容量瓶等使用習(xí)慣。
容量瓶在使用時(shí)，不能使其至于高于40攝氏度的環(huán)境下，否則容量瓶會(huì)發(fā)生變形。
4、定量操作。
這個(gè)包括容量瓶和移液管的使用，注意事項(xiàng)一是移液管吸液時(shí)，液面不要高刻度太多，放液時(shí)千萬(wàn)不要用洗耳球吹，并且盡量保持每次操作時(shí)間都一樣，粘度大的溶液尤其需要如此。二是觀察液面時(shí)，要使容量瓶和移液管保持垂直，這時(shí)很多人喜歡用三根手指捏住，其實(shí)這樣不容易保持垂直，最好用兩根手指，輕輕捏住就好。三是注意接觸容量瓶移液管等的面積越小越好，以免體溫加熱溶液。
5、溫度。
a）如果對(duì)照品和樣品沒(méi)有用同一份稀釋劑稀釋的話，兩者就會(huì)有差異，受到溫度變化的影響也是不一樣的。比如，所用的稀釋劑為水：甲醇=50：50，對(duì)照溶液用的是上次配好的，然后樣品用的是新配的，因?yàn)樗图状蓟旌蠒?huì)放熱，其體積也會(huì)增大，等到進(jìn)樣時(shí)，樣品溶液回至室溫，體積減小，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果偏高。
b）如果前后室溫變化的話，也會(huì)造成分析結(jié)果的誤差。比如，對(duì)照溶液進(jìn)樣時(shí)，是正常上班時(shí)間，實(shí)驗(yàn)室開(kāi)了空調(diào)，溫度為20℃，而到樣品溶液進(jìn)樣時(shí)，已經(jīng)到下班時(shí)間了，實(shí)驗(yàn)室人員下班時(shí)將空調(diào)關(guān)閉，實(shí)驗(yàn)室溫度已經(jīng)降為10℃，這時(shí)樣品溶液濃度肯定也會(huì)增大。
c）由于對(duì)照品相對(duì)比較貴重，一般實(shí)驗(yàn)室都會(huì)保存一段時(shí)間。如果下次分析時(shí)沒(méi)有回至室溫，或此時(shí)室溫與對(duì)照品溶液配制時(shí)的溫度已經(jīng)發(fā)生了明顯的變化，都會(huì)造成分析結(jié)果的誤差。
d）有些人配好樣品后，喜歡用手去握著容量瓶，細(xì)心觀察的就會(huì)發(fā)現(xiàn)一會(huì)之后液面就明顯高于刻度。如果操作者沒(méi)有注意這點(diǎn)，有的樣品立即進(jìn)樣，有的排隊(duì)過(guò)了一會(huì)再進(jìn)樣，就會(huì)造成誤差。
以上所述的，稀釋劑為純有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑比例很高的情況下，誤差更明顯，而這些往往容易被忽視。
（內(nèi)容來(lái)源液相色譜之家）
