在使用 金相顯微鏡 時可以用以下幾種方法進行觀察。
一. 明視野察看(Bright field)
明視野鏡檢是人人比擬熟習的一種鏡檢方法,普遍使用于病理、查驗,用于察看被染色的切 片,一切顯微鏡均能完成此功用。在此不再贅述。
二. 暗視野察看(Dark field)
暗視野實踐是暗場照明。它的特點和明視野分歧,金相顯微鏡不直接察看到照明的光線,而察看到的是被檢物體反射或衍射的光線。因而,視場成為陰郁的布景,而被檢物體則出現(xiàn)亮堂的像。暗視野的道理是依據(jù)光學上的丁道爾現(xiàn)像,微塵在強光直射經(jīng)過的狀況下,人眼不克不及察看,這是由于強光繞射形成的。若把光線斜射它,因為光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。暗視野察看所需求的非凡附件是暗視野聚光鏡。金相顯微鏡的這種觀察法特點是不讓光束由下至上的經(jīng)過被檢物體,而是將光線改動路子,使其斜射向被檢物體,使照明光線不直接進入物鏡,應(yīng)用被檢物體外表反射或衍射的光構(gòu)成亮堂圖像。暗視野察看的分辯率遠高于明視野察看,*高達0.02-0.004mm。
三.相襯鏡檢法(Phase contrast)
在光學顯微鏡的開展進程中,相襯鏡檢術(shù)的創(chuàng)造成功,是近代顯微鏡技能中的主要成就。我們曉得,人眼只能區(qū)分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),關(guān)于無色透明的生物標本,當光線經(jīng)過時,波長和振幅轉(zhuǎn)變不大,在明場察看時很難察看到標本。
相襯顯微鏡應(yīng)用被檢物體的光程之差進行鏡檢,也就是有用有利地勢用光的干預(yù)現(xiàn)像,將人眼不成分辯的相位差變?yōu)榭煞洲q的振幅差,即便是無色通明的物質(zhì)也可成為明晰可見。這大大便當了活體細胞的察看,因而相襯鏡檢法普遍使用于倒置顯微鏡。
1. 相襯鏡檢法在安裝上與明場分歧,有一些非凡要求:
( 1 )環(huán)狀光闌(Ring slit): 裝在聚光鏡的下方,而與聚光鏡組合為一體--相襯聚光鏡。它是由巨細分歧的環(huán)形光闌裝在一圓盤內(nèi),外面標有10X、20X、40X、100X等字樣,與相對應(yīng)倍數(shù)的物鏡共同運用。
( 2 )相板(Phase plate): 裝在物鏡的后焦平面處,它分為兩局部,一是經(jīng)過直射光的局部,為半通明的環(huán)狀,叫共軛面;另一是經(jīng)過衍射光的局部,叫"賠償面"。有相板的物鏡稱"相襯物鏡",外殼上常有"Ph"字樣。
2. 相襯鏡檢法是一種比擬復(fù)雜的鏡檢辦法,想要獲得好的察看結(jié)果,顯微鏡的調(diào)試十分主要。除此之外還應(yīng)留意以下幾個方面。
( 1 )光源要強,悉數(shù)開啟孔徑光闌;
( 2 )運用濾色片,使光波近于單色;
四.微分干預(yù)相襯鏡檢術(shù)(Differential interference contrast DIC)
微分干預(yù)相襯鏡檢術(shù)呈現(xiàn)于60年月,它不只能察看無色通明的物體,并且圖像出現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不克不及到達的某些長處,察看結(jié)果更為真切。
1. 道理
微分干預(yù)相襯鏡檢術(shù)是應(yīng)用特制的渥拉斯頓棱鏡來分化光束。割裂出來的光束的振動偏向互相垂直且強度相等,光束辨別在間隔很近的兩點上經(jīng)過被檢物體,在相位上略有差異。因為兩光束的裂距極小,而不呈現(xiàn)重影現(xiàn)像,使圖像出現(xiàn)出立體的三維覺得。
2. 微分干預(yù)相襯鏡檢術(shù)所需的非凡部件:
(1) 起偏鏡
(2) 檢偏鏡
(3) 渥拉斯頓棱鏡2塊
3. 微分干預(yù)鏡檢時的留意事項
(1)因微分干預(yù)相襯活絡(luò)度高,制片外表不克不及有污物和塵土。
(2)具有雙折射性的物質(zhì),不克不及到達微分干預(yù)相襯鏡檢的結(jié)果。
(3)倒置顯微鏡使用微分干預(yù)相襯時,不克不及用塑料培育皿。
五 . 熒光鏡檢術(shù)
熒光鏡檢術(shù)是用短波長的光線照耀用熒光素染色過的被檢物體,使之受激起后而發(fā)生長波長的熒光,然后察看。熒光鏡檢術(shù)普遍使用于生物,醫(yī)學等范疇。
1.熒光鏡檢術(shù)普通分為透射和落射式兩品種型。
(1)透射式:激起光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視野聚光鏡,使激起光不進入物鏡,而使熒光進入物鏡。它在低倍狀況下亮堂,而高倍則暗,在油浸物鏡下較難操作,尤以低倍的照明局限難于確定,但能獲得很暗的視野布景。透射式不合用于非通明的被檢物體。
(2)落射式:透射式當前簡直被裁減,新型的熒光顯微鏡多為落射式,光源來自被檢物體的上方,在光路中具有分光鏡,所以對通明和不通明的被檢物體都合用。因為物鏡起了聚光鏡的效果,不只便于操作,并且從低倍到高倍,可以完成整個視場的平均照明。
2.熒光鏡檢術(shù)的留意事項
(1) 激起光長工夫的照耀,會發(fā)作熒光的衰減和淬滅現(xiàn)像,因而盡能夠縮短察看工夫,臨時不察看時,使用擋板隱瞞激起光。
(2)作油鏡察看時,使用"無熒光油"。
(3)熒光簡直都較弱,應(yīng)在較暗的室內(nèi)進行。
(4)電源*好裝穩(wěn)壓器,不然電壓不穩(wěn)不只會降低汞燈的壽命,也會影響鏡檢的結(jié)果。