分光光度計原理內(nèi)行人都知道，物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都是具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理比耳定律。
然而對于分光光度計吸光度測量條件的選擇，相信很多人都不太了解，一般來說可依據(jù)以下幾點去綜合選擇：
1.入射光波長的選擇
應(yīng)根據(jù)吸收光譜曲線，選擇溶液具有最大吸收時的波長作為入射光的波長。
如顯色劑與鈷絡(luò)合物在420nm波長處均有最大吸收峰。如用此波長測定鈷，則未反應(yīng)的顯色劑會造成干擾而降低測定的準(zhǔn)確度。因此必須選擇在500nm波長處測定，在此波長下顯色劑不發(fā)生吸收。而鈷絡(luò)合物則有一吸收平臺。
2.參比溶液的選擇
1）如果顯色劑或其他試劑略有吸收，應(yīng)用空白溶液（不加試樣的溶液）作參比溶液。
2）如果僅待測物與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤骸?/p>
3）如試樣中其他組分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，則當(dāng)顯色劑無吸收時，可用試樣溶液作參比溶液，當(dāng)顯色劑略有吸收時，可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。
3.吸光度讀數(shù)范圍的選擇
實踐證明，吸光度在0.2-0.5內(nèi)時，測量的相對誤差最小。
可用兩種方法來調(diào)整被測溶液的吸光度：
1）控制被測溶液的濃度。如改變?nèi)恿浚淖內(nèi)芤旱臐饪s倍數(shù)或稀釋倍數(shù)。
2）選擇不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程長的比色皿，吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
