液相色譜柱使用壽命大約為1000針,保護(hù)柱的壽命大約為280針。色譜柱的使用壽命主要受色譜條件、使用方式和保存條件的影響。
一、色譜條件
1、在相同實(shí)驗(yàn)中,以前使用的色譜柱壽命長(zhǎng)很多
這種情況應(yīng)該檢查一下色譜條件是否保持一致,樣品的組成、樣品中強(qiáng)吸收的污染物會(huì)破壞色譜柱的柱效。檢查管路的密封圈是否完好?脫落的密封圈會(huì)堵塞色譜柱過濾器和填料的頂層,從而影響樣品的分布。
如果可以確認(rèn)色譜條件沒有變化,那么可以推測(cè)是柱床松動(dòng)的原因。在實(shí)驗(yàn)室和運(yùn)輸過程中色譜柱劇烈的震動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致柱床松動(dòng)。
2、在實(shí)驗(yàn)中用過的所有的色譜柱在使用相同次數(shù)后全部損壞
最大可能是樣品中的成分吸附在色譜柱的頂端?赡苁窃诹鲃(dòng)相中不溶的沉淀物或者是強(qiáng)吸收的物質(zhì)。
二、使用方法
按照生產(chǎn)商的說明使用柱子的話一般很少發(fā)生,但實(shí)際使用中會(huì)出現(xiàn)各種情況。
1、流動(dòng)相pH超出使用范圍,導(dǎo)致的柱子鍵和相水解或基質(zhì)溶解。樣品用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶解的話也會(huì)發(fā)生上述情況。
2、高溫也會(huì)導(dǎo)致色譜柱損壞,如高溫會(huì)加速鍵合相溶解。
3、特殊柱子注意事項(xiàng),例如氨基柱可以和醛,酮反應(yīng)。氨基柱在不含緩沖鹽的水溶液中會(huì)顯強(qiáng)堿性,分解部分硅膠;
4、暴露在錯(cuò)誤溶劑中的柱子會(huì)發(fā)生坍塌,因?yàn)檫@些柱子是基于非常松散的結(jié)構(gòu),是因顆粒之間的黏著而部分的結(jié)合在一起的。如果置于能破化這種黏著的流動(dòng)相中,柱床很有可能會(huì)坍塌。氰基柱在中性溶液,苯基柱在THF中有時(shí)就會(huì)發(fā)生這種問題。這也是不要沖洗柱子的另一個(gè)理由。
5、采用合適的樣品準(zhǔn)備技術(shù)處理樣品。用和分析柱相似的固相萃取柱進(jìn)行固相萃。SPE)。
6、使用保護(hù)柱。保護(hù)柱是作為犧牲柱裝在色譜柱前使用的,出現(xiàn)問題的時(shí)候就會(huì)被替換掉。保護(hù)柱的填料和裝填技術(shù)必須和分析柱一樣;
7、反沖柱子。反現(xiàn)在的裝填技術(shù)可以使柱子承受反沖,能更好的去除柱頭端的污染物。
三、保存條件
反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保存:使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。
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