一、微量比色皿的種類
1、短光程微量比色皿
此種比色皿的特點是比色池前后壁之間的距離很窄,所以注入的液體量相應變小了,改變兩壁間的距離就可相應改變樣品體積,已達到節(jié)省樣品或試劑的效果。
容積一般在100微升左右。
優(yōu)點是:由于池面受光面積很大,無需進行光斑與池子間的擬合調整,安放到比色池架時很隨意,不用顧忌每次插拔比色池的位置的同一性;缺陷是清洗內壁較為困難。
2、通用型微量池
這種微量比色皿的外形尺寸與普通標準池無二異,并且光程L仍保持10mm不變,只是在池子與光軸平行的兩側內壁上粘貼了兩塊內襯石英(或光學)玻璃已達到減少池子容積的目的,這樣改變兩塊玻璃的厚度便可改變池子的容積。
此種池子的裝入樣品量大約在0.35~1mL間。
值得一提的是,通用型微量池分為兩種類型,主要區(qū)別在貼在池子兩壁上的內襯玻璃的材料。一種是普通石英(或光學玻璃),其價格較為便宜;另一種是黑石英材料,價格較為昂貴,使用黑石英材料做內襯的池子的優(yōu)點是:雜散光較少。
使用此種微量池的關鍵點是:使用前一定要檢查入射光斑是否正確地照射到光槽上,如果光斑打偏在內襯玻璃上的話,將會產(chǎn)生很大的噪聲。此外由于儀器在制造時,很難保證光軸與比色池架的垂直中心完全吻合,因此光斑難免會偏離微量池的光槽。為了保證光斑完全照射到光槽中,有的儀器在使用通用微量池時往往在池子的前面加裝一片遮光板,該遮光板的中央開一條縫隙,該縫隙與微量池的光槽的寬度一致,這樣就保證了光斑完全照射到光槽中了。
這種通用型微量池的優(yōu)點是:普及性很強,基本可以配置在任何分光光度計上。同時,國產(chǎn)池子的價格也不算貴,普遍受到使用者的歡迎。但是該池子與短距離微量池一樣有個相同的缺點,那就是清洗時比較麻煩,使用一般的沖洗措施不易徹底洗凈池內壁的殘留物,必須采用超聲波清洗器。
3、專用超微量比色皿
此種比色皿的容積均很小,一般進樣量小于50微升,非常適合生物樣品及微量萃取樣品。這種池子的盛液槽很小且呈水平狀,改變容積的方法也是改變池子的光程L,即前后壁的距離。
此種比色皿的優(yōu)點除了進樣量少之外,還有進樣便捷和進樣量易于控制(使用普通加樣槍即可)、清洗方便等特點。美中不足的是,由于使用該類型比色皿時要配備專用的池架,所以其價格較為昂貴。
備注:該池子在使用前,要做微量池、遮光板與光束的擬合,通過透過率或光強度的改變來監(jiān)控池架的正確位置,這個工作由圖中的調整螺釘來完成。
二、為何要使用微量比色皿
1、測試樣量稀少
出于種種原因,當被檢測的樣品量一般少于1mL時,如果仍然按照傳統(tǒng)的檢測方法(即將樣品放入到標準比色皿中檢測時),由于入射光束不能照射到或不能完全照射到樣品上,所以不能得到正確的檢測結果。其原因是:我們經(jīng)常使用的標準比色皿,規(guī)格為10×10mm,容積為4mL。
而入射光束的光斑一般均照射在比色皿的中部,換句話說、如果樣品少于1.5mL時,從單色器發(fā)出的光束光斑是照射不到樣品上去的,何況區(qū)區(qū)的幾百微升的樣品呢?因此當樣品量少時只能采用微量比色皿。
2、測試樣價格昂貴
有的標準試劑或標樣的價格很貴,如果配制的測試樣品量過大會造成不必要的經(jīng)濟損失。
例如當前比較熱門的DNA測試,其標準樣品每克的價錢大約1萬元人民幣。所以使用微量比色皿是勢在必行之舉。
三、使用微量比色皿的注意事項
1、無論何種微量池,在使用前一定要檢查比色池與光斑的擬合狀態(tài)。這點往往是使用者易于忽略的地方,結果造成測量值的重現(xiàn)性和噪聲水平變差。
2、由于微量池內腔體的狹窄,故給清洗工作帶來較使用普通池更大的麻煩,這點需要使用者給予充足的重視。
(內容參考儀器信息網(wǎng))
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