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一、熒光分光光度計(jì)的組成
熒光分光光度計(jì)的基本組成結(jié)構(gòu)包括:顯示系統(tǒng)、樣品室、單色器、激發(fā)光源和檢測(cè)器。1、顯示系統(tǒng)
顯示系統(tǒng)由光度表、計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)等組成。
2、樣品室
通常由石英池架或固體樣品架組成。測(cè)量液體樣品時(shí),光源與樣品成直角安排,測(cè)量固體樣品時(shí),光源與樣品成銳角安排。
熒光儀上用的樣品池與紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上用的樣品池存在較大差異,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上用的比色皿材質(zhì)常為玻璃或石英,方形,兩面透光。測(cè)熒光用的樣品池稱為熒光池,是用石英材質(zhì)制成,形狀也為長(zhǎng)方形或方形,但四面透光。低溫?zé)晒鉁y(cè)定時(shí)還需在熒光池的外面再套一個(gè)充液氮的透明石英真空瓶。
3、單色器
單色器用來(lái)分離出所需要的單色光。早期的熒光計(jì)是以濾光片來(lái)分離單色光,現(xiàn)在熒光分光光度計(jì)中應(yīng)用最廣的是光柵單色器。一般儀器上裝有兩個(gè)單色器,激發(fā)單色器和發(fā)射單色器。置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器,篩選出特定的發(fā)射光譜。單色器上有進(jìn)、出光兩個(gè)狹縫,增大狹縫寬度則信號(hào)強(qiáng)度增強(qiáng),減小狹縫寬度則分辨率增大。單色器的色散能力與雜散光水平是兩個(gè)重要的性能指標(biāo),比較理想的單色器應(yīng)具有低雜散光,以減少雜散光對(duì)熒光測(cè)量的干擾,同時(shí)具有高色散能力,以便弱的熒光也可以被檢測(cè)到。
4、激發(fā)光源
常見(jiàn)的激發(fā)光源有高壓氙燈、高壓汞蒸氣燈、激光器、閃光燈等。高壓氙燈能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,且在300~400nm范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等,成為目前應(yīng)用最多的連續(xù)光源。高壓氙燈的外殼為石英玻璃,內(nèi)部充壓力為5倍標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的氙氣,工作時(shí)壓力可達(dá)到20倍標(biāo)準(zhǔn)大氣壓。以激光器作光源時(shí),激發(fā)光強(qiáng)度大且單色性好,能極大地提高熒光分析的靈敏度。此外,目前儀器中應(yīng)用較多的閃光燈有氫燈、氮燈、脈沖激光燈等類型。
5、檢測(cè)器
檢測(cè)器是將光信號(hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào),一般用光電管或光電倍增管(PMT)作檢測(cè)器。在一定條件下,PMT的電流量與入射光強(qiáng)度成正比,它測(cè)量的數(shù)據(jù)是眾光子脈沖響應(yīng)的平均值。加在PMT上的電壓越高,則其放大作用越大。但是過(guò)大的電壓會(huì)造成PMT損壞,這點(diǎn)在實(shí)際使用中要注意。電荷耦合器件陣列檢測(cè)器(CCD)是近年來(lái)出現(xiàn)的一類新型的光學(xué)多通道檢測(cè)器,檢測(cè)光譜范圍寬、暗電流小、噪聲低、靈敏度高,可獲取彩色、三維圖像。因其價(jià)格比較昂貴,常用在高檔熒光儀上。
二、熒光分光光度計(jì)的日常保養(yǎng)
熒光分光光度計(jì)能夠?qū)?jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)進(jìn)行成分分析,應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工、食品檢測(cè)、水質(zhì)分析、生命科學(xué)、藥物分析和藥理學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計(jì)的日常保養(yǎng)具體如下:
1、每天檢查室內(nèi)的防塵設(shè)施,發(fā)現(xiàn)紕漏及時(shí)維修。
2、每天清理儀器及周邊的灰塵,儀器外殼使用干凈的濕布,其它地方建議使用吸塵器。
3、熒光分光光度計(jì)的電源要穩(wěn)定,配備穩(wěn)壓器。
4、熒光分光光度計(jì)應(yīng)放置在不潮濕、無(wú)振動(dòng)的地方。
5、熒光分光光度計(jì)的放置應(yīng)水平。
6、熒光分光光度計(jì)周圍保留30厘米以上空間,便于散熱。
7、不要在熒光分光光度計(jì)上放置重物。
8、不要用水及其它洗滌劑沖洗熒光分光光度計(jì)。
9、檢測(cè)結(jié)束后,請(qǐng)關(guān)閉熒光分光光度計(jì)的電源,延長(zhǎng)其使用壽命。
10、不要擅自拆機(jī)。