一．概述 1.簡介 液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。 2.分類 液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。 3.組成 現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。 4.功能及應(yīng)用 對高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過色譜柱和淋洗劑并以實現(xiàn)分離。應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。 高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液, 不受樣品揮發(fā)性的限制,活動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不不亂和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。 與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPL C 所達(dá)到的高分辨率和高敏捷度, 使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。跟著固定相的發(fā)展, 有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的前提下完成其分離。 HPL C 成為解決生化分析題目最有前途的方法。因為HPL C具有高分辨率、高敏捷度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用, 流出組分易收集等長處,因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食物分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。光度計 液相色譜- 質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍正視, 如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等; 液相色譜- 紅外光譜連用也發(fā)展很快,如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類, 海水中的不揮發(fā)烴類, 使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。 二．常見故障處理 故障1 活動相內(nèi)有氣泡, 封閉泵, 打開泄壓閥, 打開p urge鍵, 清洗脫氣, 氣泡不斷從過濾器冒出, 進(jìn)入活動相, 不管打開p urge 鍵幾回,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。 原因過濾器長期陶醉于乙酸銨等緩沖液內(nèi), 過濾器內(nèi)部因為霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),梗阻了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)由濾器進(jìn)入活動相。 處理過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中12～36 小時, 輕輕震蕩幾回, 再將過濾器用純水清洗幾回, 打開泄壓閥, 打開p urge 鍵,清洗脫氣, 如仍有氣泡不斷從過濾器冒出, 繼承將過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞, 活動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1. 0～3. 0ml/ min ,純水沖刷過濾器1 小時左右。即可將過濾器清洗干凈。封閉泄壓閥,純甲醇沖刷半小時即可。 故障2 柱壓高原因(1) 緩沖液鹽分如(乙酸銨等) 沉積于柱內(nèi); (2) 樣品污染沉積。 處理對于第一種情況先用40～50 ℃的純水,低速正向沖刷柱子, 待柱壓逐漸下降后, 相應(yīng)進(jìn)步流速沖刷, 柱壓大幅度下降后, 用常溫純水沖刷, 之后用純甲醇沖刷柱子30 分鐘; 對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖刷柱子, 然后換成甲醇沖刷, 接著用甲醇+ 異丙醇(4 + 6) 沖刷柱子(沖刷時間的是非由樣品污染的情況而定) , 再用換成甲醇沖刷, 然后用純水沖刷, 最后甲醇沖刷正向沖刷柱子30 分鐘以上。 故障3 既無壓力指示,又無液體流過[1 >。 原因(1) 泵密封墊圈磨損; (2) 大量氣泡進(jìn)入泵體。 處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時, 用一個50ml 的玻璃針筒在泵的出口處匡助抽出空氣。 故障4 壓力波動大,流量不不亂. 原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。 處理工作中留意觀察活動相的量, 保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,活動相要充分脫氣[2 >。如為單向閥和閥座之間夾有異物, 拆下單向閥, 放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗. 故障5 出峰不佳,峰分叉。 原因(1) 色譜柱被污染; (2) 柱頭填料塌陷。 處理對于第一種情況, 先用純水反向沖刷柱子, 然后換成甲醇沖刷, 接著用甲醇+ 異丙醇(4 + 6) 沖刷柱子(沖刷時間的是非由樣品污染的情況而定) , 再換成甲醇沖刷, 然后用純水沖刷,最后甲醇沖刷正向沖刷柱子30 分鐘以上。如沖刷后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部門(污染的填料) ,裝入新填料, 滴一滴甲醇, 填料下陷, 再填, 用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊, 再填平, 滴甲醇, 再壓緊反復(fù)幾回, 直至裝滿填平[2 >。柱頭用甲醇沖刷干凈, 擦凈柱外壁的填料, 擰緊柱頭,用純甲醇沖刷30 分鐘以上。 故障6 峰面積重復(fù)性不佳。 原因(1) 進(jìn)樣閥漏液; (2) 加樣針不到位。 處理對于第一種情況更換進(jìn)樣閥墊圈; 對于第二種情況保證加樣針插到底,打針樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD 狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJ EC T 狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的正確。日常工作中, 液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要, 如要留意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中, 儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液, 每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖刷干凈,防止無機(jī)鹽析出或沉積; 樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì), 完全溶解, 盡量減少對色譜柱的污染, 以延長色譜柱的使用壽命, 同時避免打針過濃的樣品溶液, 以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞; 色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。 |
